Onkoloji Test Kiti

Eligene® NGS kitleri, ilgilenilen genlerin (ler) in gerekli tüm hedef bölgelerinin multipleks PCR amplifikasyonunu mümkün kılar.Her multipleks PCR reaksiyonu için önerilen DNA miktarı, formalinle sabitlenmiş parafine gömülü (FFPE) malzemeden veya kandan türetilen 20 ila 100 ng DNA'dır.Daha sonra, ortaya çıkan amplikonlar orta sekanslarla barkodur ve numune başına karışıktır.Bu numune, üreticinin talimatlarına göre büyük ölçüde paralel sekanslama (MPS) için bir NGS enstrümanı Illumina kullanılarak ölçülür ve sıralanır.Ortaya çıkan sekans okumaları, daha sonra varyant konumları tanımlamak için hedeflenen gen (ler) in referans dizisi ile karşılaştırılarak analiz edilir.

giriiş

Eligene® NGS kitleri, bir veya daha fazla multipleks PCR reaksiyonu için kullanılır ve bu da bir numunenin hedef bölgelerinin amplifikasyonu ile sonuçlanır.Amplifikasyon için, sıcak bir DNA polimeraz içeren kullanıma hazır bir mastermix kullanılır.Her bir multipleksin ortaya çıkan amplikonları 100 kat seyreltilir.İkinci adımda, Eligene® Adaptor-Il Ngs kiti kullanılarak ikinci bir PCR turu gerçekleştirilir ve tüm amplikonların Illumina Miseq sekanslaması için gerekli MIDS ve P7 ve P5 adaptörlerini dahil etmesini sağlar.Ortaya çıkan etiketli amplikonlar, önceden tanımlanmış bir test spesifik karıştırma şeması uygulanarak birey başına karışıktır.Her amplikon kütüphanesi daha sonra 150bp'den daha kısa küçük artık DNA fragmanlarından saflaştırılır ve DNA konsantrasyonu, konsantrasyon standartlarına sahip gerçek zamanlı bir PCR kullanılarak belirlenir.