Araştırma Test Kiti

5 AMP ile aktive edilen protein kinaz (AMPK), hücre içi enerji dengesinin anahtar sensörüdür. AMPK, kas kasılması, açlık veya hipoksi gibi bir dizi faktörden kaynaklanabilecek AMP/ATP oranındaki bir artışa yanıt olarak aktive edilir. AMPK, alfa- (63 kDa), beta (38 kDa) ve gama- (38 kDa) alt birimlerinden oluşan bir heterotrimerik protein kompleksidir. Her alt birim için izoformlar tanımlanmıştır (alfa-1, alfa-2, beta-1, beta-2, gamma-1, gama-2, gama-3) teorik olarak 12 farklı proteinin oluşumuna izin verir. Alfa-alt birim, bir serin/treonin kinaz alanı içerir ve düzenleyici alt birimler AMP ve ATP ve glikojen için bağlanma yerleri içerir. AMPK, katalitik alan içinde THR-172 üzerinde fosforilasyon ile aktive edilir. AMP bağlanması, bazal seviyeye kıyasla AMPK aktivitesinde 2 ila 5 kat artışla sonuçlanır. AMP'nin alfa-alt biraya bağlanması, kinazın allosterik aktivasyonuna neden olur ve AMPK'yı Thr-172'nin fosforilasyonundan koruyan kinaz alanında konformasyonel bir değişikliğe neden olur. Bu hücre bazlı ELISA, tüm hücrelerde fosforile edilmiş AMPK ölçer ve sinyali toplam protein içeriğine normalleştirir. Antikor hem alfa-alt birimleri tanır ve bu nedenle tüm dokulardan (insan, fare, sıçan) hücreler için kullanılabilir. Bu basit ve verimli test, hücre lizat preparasyonu ihtiyacını ortadan kaldırır ve kısa süreli ve uzun süreli deneylerde AMPK regülasyonunu incelemek için kullanılabilir. Bu tahlilde, 96 oyuklu plakalarda yetiştirilen hücreler sabitlenir ve kuyularda geçirgenleştirilir. AMPK fosforilasyonu (PAMPK), bir floresan ELISA ve ardından her oyukta toplam protein ölçümü kullanılarak ölçülür.